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      原位雜交技術(shù)

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-09-02 11:56:27    來(lái)源:儀器耗材行業(yè)網(wǎng)    作者:labdiy    瀏覽次數:328
      導讀

      原位雜交技術(shù)及其基本原理


      原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是由分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細胞學(xué)相結合而產(chǎn)生的一門(mén)新興技術(shù),始于20世紀60年代。

      1969年美國耶魯大學(xué)的Gall(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細胞雜交,將該基因進(jìn)行定位,與此同時(shí)BuongiornoNardelliAmaldi(1970)相繼利用同位素標記核酸探針進(jìn)行了細胞或組織的基因定位,從而創(chuàng )造了原位雜交技術(shù)。

      自此以后,由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展原位雜交儀,特別是20世紀70年代末到80年代初,分子克隆、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構建成功,為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎。

      原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNARNA互補配對,結合成專(zhuān)一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。

      為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件:組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物。

      RNA原位核酸雜交又稱(chēng)RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術(shù)。

      其基本原理是:在細胞或組織結構保持不變的條件下,原位雜交儀用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),所形成的雜交體 (Hybrids)經(jīng)顯色反應后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀(guān)察其細胞內相應的mRNA、rRNAtRNA分子。RNA原位雜交技術(shù) 經(jīng)不斷改進(jìn),其應用的領(lǐng)域已遠超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為最有效的分子病理學(xué)技術(shù),同時(shí)在分析低豐度和罕見(jiàn)的mRNA表達方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。


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      (文/labdiy)
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